人泛素結(jié)合酶ELISA試劑盒的樣品收集及保存方法對于確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。以下是詳細(xì)的樣品收集及保存步驟:樣品收集
1. 血清樣品:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管收集全血標(biāo)本,避免任何細(xì)胞刺激。收集后,在室溫放置2小時或4°C過夜,然后1000×g離心20分鐘,取上清即血清。血清可置于-20°C或-80°C保存,但需避免反復(fù)凍融。
2. 血漿樣品:使用EDTA、檸檬酸鹽或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本。采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C條件下1000×g離心15分鐘,取上清即血漿。同樣,血漿可置于-20°C或-80°C保存,但需避免反復(fù)凍融。
3. 組織勻漿:取適量組織塊,于預(yù)冷PBS中清洗去除血液,稱重后剪碎。移入玻璃勻漿器,加入5-10mL預(yù)冷PBS進行充分研磨,該過程需在冰上進行。勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進一步處理。制備好的勻漿液于5000×g離心5分鐘,留取上清備用。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清液:貼壁細(xì)胞需先用胰酶消化,離心收集細(xì)胞;懸浮細(xì)胞可直接離心收集。將收集到的細(xì)胞用冷PBS洗3次后,物理方法裂解細(xì)胞(如超聲破碎或反復(fù)凍融)。裂解后的標(biāo)本于2-8°C條件下1500×g離心10分鐘,收集上清備用。
樣品保存
1. 保存條件:所有樣品均應(yīng)密封保存,避免污染。短期(如一周內(nèi))可保存于4°C,但長期保存應(yīng)置于-20°C或-80°C,且-20°C保存不超過1個月,-80°C保存不超過2個月。
2. 解凍:樣品使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫,避免加熱使之融解。解凍后的樣品應(yīng)盡快使用,避免反復(fù)凍融。
3. 注意事項:在樣品收集、處理及保存過程中,應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范,確保樣品的純度和穩(wěn)定性。同時,根據(jù)實驗需求合理預(yù)估樣品量,避免浪費。
以上信息僅供參考,具體操作請參照試劑盒說明書及實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作流程。