人髓過氧化物酶(MPO)ELISA Kit的實驗原理與操作
發(fā)表時間:2024-05-17
人髓過氧化物酶(MPO)ELISA Kit的實驗原理基于雙抗體夾心法,通過特異性抗體與樣品中的MPO結合,形成免疫復合物,從而定量檢測MPO的含量。
實驗操作步驟如下:
1. 首先,將純化的人髓過氧化物酶(MPO)捕獲抗體包被在微孔板上,制成固相抗體。
2. 然后,向包被的微孔中依次加入待測樣品,使樣品中的MPO與固相抗體發(fā)生特異性結合。
3. 接著,加入HRP標記的檢測抗體,與已結合的MPO形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。
4. 經過徹底洗滌后,加入顯色底物TMB,在HRP酶的催化下,TMB轉化為藍色,并在酸的作用下轉化成黃色。顏色的深淺與樣品中MPO的濃度呈正相關。
5. 最后,使用酶標儀在450nm波長下測定各孔的光密度,并根據標準曲線計算樣品中MPO的濃度。
整個實驗過程需要嚴格控制操作條件,如孵育時間、洗滌次數和洗滌時間等,以確保實驗結果的準確性和可靠性。